IA вызывается грибком Aspergillus fumigatus, который многими патологами считается самой вредной плесенью в мире. «Традиционные методы диагностики, такие как посев и гистопатология инфицированных тканей, часто не позволяют обнаружить Aspergillus», — комментирует ведущий исследователь Юнь Ся, доктор философии, из Первой дочерней больницы Чунцинского медицинского университета, Чунцин, Китай.
В этом ретроспективном исследовании ученые оценили диагностическую эффективность двух анализов амплификации нуклеиновых кислот (кПЦР и NASBA) и одного метода обнаружения антигена (иммуноферментный анализ галактоманнана [GM-ELISA]) с использованием образцов крови, взятых у 80 пациентов с высоким риском Я. Из 80 пациентов 42.5% имели доказанный или вероятный IA. Пациенты поступали из отделений реанимации, гематологии, неврологии, нефрологии, гериатрии и других отделений больниц.
Тесты оценивались по отдельности и в сочетании.
По отдельности NASBA имела самую высокую чувствительность (76.47%), тогда как кПЦР предлагала самую высокую специфичность (89.13%). NASBA также был тестом, который лучше всего показал, что у пациента нет инфекции (отрицательная прогностическая ценность). NASBA и qPCR имели высокий индекс Юдена, показатель эффективности диагностического маркера.
Объединение тестов улучшило результаты.
Комбинация NASBA и кПЦР привела к 100% специфичности и 100% положительной прогностической ценности (вероятность того, что у субъектов действительно есть инфекция).
«Поскольку каждый тест имеет свои преимущества и недостатки, комбинация различных тестов может обеспечить лучшую диагностическую ценность, чем дает один тест», — говорит д-р. Ся.
Комбинация NASBA и qPCR должна быть полезной для исключения IA в подозрительных случаях, таким образом уменьшая страдания и расходы для пациентов с ослабленным иммунитетом. С другой стороны, комбинация NASBA и кПЦР могла бы быть более подходящей для скрининга пациентов с подозрением на инфекцию, потому что этот анализ имел самую высокую чувствительность."
Авторы отмечают, что NASBA предлагает преимущества быстрой амплификации (90 минут) и простой работы с низкой стоимостью инструмента по сравнению с qPCR и GM-ELISA.
Они предупреждают, что, хотя GM-ELISA широко и рутинно используется для диагностики аспергиллеза, это исследование показывает, что у него низкая чувствительность (52.94%) с разумной специфичностью (80.43%), что «уступает как NASBA, так и количественной ПЦР."
А. fumigatus повсеместно встречается в окружающей среде и встречается на разлагающихся растениях.
Для здоровых людей воздействие грибка может быть несущественным, но оно может вызвать значительную заболеваемость и смертность у людей с ослабленной иммунной системой, включая пациентов, перенесших трансплантацию органов или больных СПИДом на поздней стадии. Даже пациенты с более умеренными иммунными нарушениями, такими как диабет, плохое питание, употребление стероидов или заболевание легких, могут серьезно инфицироваться.
Симптомы могут включать жар, кашель, затрудненное дыхание, боль в груди, судороги и очаговые неврологические проблемы.
ТЕХНИЧЕСКИЕ ДЕТАЛИ ИССЛЕДОВАНИЯ
Критерии высокого риска ИА включали высокий (1,3)-?-Уровни D-глюкана (> 60 пг / мл), иммунодефицитный статус и одно из шести состояний (реципиент аллогенной трансплантации стволовых клеток, гематологическое заболевание, тяжелый иммунодефицит, длительное использование кортикостероидов, лихорадка или инфильтрат грудной клетки, не отвечающий на обычные антибиотики, или радиологическое указание на грибковое заболевание). Пациенты не получали противогрибковую терапию до тех пор, пока не были взяты образцы крови.
Первым тестом было определение ГМ, полисахаридного компонента клеточной стенки грибов, который может выделяться в сыворотку и жидкость бронхоальвеолярного лаважа во время инфекции. ГМ определяли с помощью имеющегося в продаже набора для ИФА (Platelia Aspergillus; Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA). В этом исследовании индекс GM (GMI) 0.5 было использовано.
Второй тест представлял собой выделение ДНК из Aspergillus и анализ количественной ПЦР в реальном времени.
ДНК экстрагировали из плазмы с помощью мини-набора для крови QIAamp (Qiagen, Hilden, Германия). Очищенную ДНК затем амплифицировали с помощью анализа qPCR, специфичного для рода Aspergillus, с использованием химии SYBR Green и праймеров, нацеленных на ген 28S рРНК. Нижний предел обнаружения был эмпирически определен как 10 колониеобразующих единиц конидий Aspergillus на реакцию.
Третий тест представлял собой экстракцию РНК из аспергилл и анализ NASBA.
Тотальную РНК экстрагировали из плазмы с использованием набора для быстрой экстракции общей РНК крови / жидкого образца (BioTeke, Пекин, Китай). В качестве мишени для обнаружения был выбран высококонсервативный участок 18S рРНК, специфичный для рода Aspergillus. Затем он был амплифицирован с использованием пары праймеров.
Бланк контроль, отрицательный контроль (РНК, выделенная из пациентов без инфекции Aspergillus) и положительный контроль (РНК, выделенная из Aspergillus в чистой культуре) были включены в каждый цикл.